隨著(zhù)生命科學(xué)的發(fā)展，圍繞蛋白進(jìn)行的研究越來(lái)越多，抗體試劑在實(shí)驗中的重要性越來(lái)越舉足輕重。面臨著(zhù)紛呈復雜的抗體試劑市場(chǎng)，如何選擇到適合自己實(shí)驗的抗體就變得尤為重要。
當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗需要的抗體，并恰當保存使用，是每個(gè)科研人員需要細心考慮的?？贵w種類(lèi)繁多，品牌眾多，技術(shù)參數不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買(mǎi)到高質(zhì)量?jì)r(jià)格合適的抗體，并準確地做出我們想要的結果，其中有很多細節需要注意。
關(guān)于抗體特異性的選擇：
特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗方法特異性、標記物的特異性。
?。?）蛋白特異性
針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個(gè)細節要區分，重組表達的蛋白和內源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說(shuō)明書(shū)的檢測說(shuō)明。如果重組蛋白不是全長(cháng)表達，則需要注意抗體的免疫原區域是否在重組蛋白區域內。內源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對，并結合抗體免疫原序列，查看交叉反應的情況。磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著(zhù)可能有不同的機制存在，不宜一概而論。
?。?）種屬特異性
同種蛋白不同物種，有著(zhù)或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設計多肽抗原的，根據蛋白的同源性情況與其他種屬發(fā)生交叉反應。需要參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過(guò)蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì )受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。
?。?）實(shí)驗方法特異性
目前使用抗體的實(shí)驗方法有很多，不同的使用方法過(guò)程中，因為對蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。具體的根據說(shuō)明書(shū)注明的產(chǎn)品應用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會(huì )將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗的檢測，目前檢測比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對具體的實(shí)驗方法沒(méi)有找到合適的抗體的，可以結合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請到免費的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。
?。?）標記物的特異性
一般基于實(shí)驗操作的實(shí)驗方法不會(huì )使用帶有標記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過(guò)二抗類(lèi)的試劑標記達到結果呈現的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗，可能就會(huì )使用到直接標記的一抗，比如流式實(shí)驗。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不通的參數要求選擇對應的標記物。在免疫熒光雙標實(shí)驗中，需要選配不同的熒光標記物。
