Clodronate Liposomes產(chǎn)品說(shuō)明

Clodronate Liposomes產(chǎn)品說(shuō)明

Clodronate liposomes巨噬細胞清除

去除巨噬細胞（depletion of macrophages）是研究巨噬細胞功能的重要方法。荷蘭阿姆斯特丹Vrije University 的Nico van Rooijen教授開(kāi)發(fā)的一款Clodronate liposomes，可以利用巨噬細胞的內吞機制，將膜不通透性的氯磷酸（Clodronate）帶入細胞內，從而達到去除巨噬細胞的目的。

作用原理：

兩親性磷脂分子在水中可以形成同心圓形式的磷脂雙分子層球體，磷脂雙分子層中間通過(guò)水相分隔。溶解在水溶液中的氯磷酸鹽在形成脂質(zhì)體的過(guò)程中被包裹進(jìn)磷脂雙分子層之間的水相中（如圖1）。游離的氯磷酸鹽不能自由的通過(guò)脂質(zhì)體的磷脂雙分子層。隨著(zhù)脂質(zhì)體被巨噬細胞吞噬，在巨噬細胞溶酶體磷酸酶的作用下，溶解在脂質(zhì)體水相中的氯磷酸鹽就可以被逐步釋放出來(lái)，并累積在細胞內，當其達到一定濃度時(shí)，巨噬細胞將會(huì )受到不可逆轉的損傷，從而進(jìn)入凋亡過(guò)程（如圖2）。從死亡的巨噬細胞中釋放出來(lái)的氯磷酸鹽在細胞外的半衰期極短（大約15min），可以通過(guò)泌尿系統排除體外。

圖1：氯磷酸-脂質(zhì)體（Clodronate liposomes）復合物。在脂質(zhì)體的形成過(guò)程中氯磷酸通過(guò)溶解在水溶液中被包裹進(jìn)磷脂雙分子層之間的水相中。

圖2：巨噬細胞清除原理。包裹著(zhù)氯磷酸（方塊）的脂質(zhì)體通過(guò)巨噬細胞的內吞作用進(jìn)入細胞，與溶酶體（L）融合后，在磷脂酶(箭頭)的作用下，釋放出氯磷酸，當細胞內氯磷酸的濃度達到一定濃度，就會(huì )對巨噬細胞造成不可逆轉的損害，從而迫使其進(jìn)入細胞凋亡。

產(chǎn)品性質(zhì)：

1ml脂質(zhì)體體懸液中所含的氯磷酸大約為5mg。所用的磷酸鹽緩沖液為10 mM Na2HPO4，10 mM NaH2PO4，140 mM NaCl。

脂質(zhì)體體內注射：

隔日尾靜脈注射200μl Clodronate liposome，根據實(shí)驗要求制定注射日程。通過(guò)免疫組化或流式檢測巨噬細胞去除效率。

尾靜脈注射方法：

（1）將小鼠放在倒扣的飯盒內，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動(dòng)脈和3條靜脈，2條動(dòng)脈分別在尾部的背側面和腹側面，3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側的靜脈；

（2）將紗布浸泡于約70度的溫水中，拿出后包裹尾巴，以達到使尾部血管擴張及軟化表皮角質(zhì)的目的；

（3）行尾部靜脈注射時(shí)，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約50px一段，使皮膚緊張，靜脈更為充盈，右手持1ml針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30°角)，從尾巴的下1/4處進(jìn)針，開(kāi)始注入藥物時(shí)應緩慢，仔細觀(guān)察，如果無(wú)阻力，無(wú)白色皮丘出現，說(shuō)明已刺入血管，可正式注入藥物。

（4）有的實(shí)驗需連日反復尾靜脈注射給藥，注射部位應盡可能從尾端開(kāi)始，按次序向尾根部移動(dòng)，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓1-2min，止血。

Clodronate Liposomes產(chǎn)品說(shuō)明

效果展示：

FAQ:

Q:收到Clodronate liposomes后該如何操作？

A:收到氯磷酸脂質(zhì)體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時(shí)作為原液使用，不能進(jìn)行稀釋。脂質(zhì)體很容易發(fā)生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質(zhì)體不能馬上使用，需要恢復到室溫才能進(jìn)行注射。

Q: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細胞清除？

A:產(chǎn)品可以用于體外巨噬細胞的清除，但是這種方法比較適合體內實(shí)驗。主要是由于在體外培養過(guò)程中，從死亡細胞釋放的氯磷酸或者是從脂質(zhì)體中“滲漏”出來(lái)氯磷酸，會(huì )一直存在于培養基中，但是在體內，氯磷酸的半衰期很短，很快就會(huì )被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會(huì )進(jìn)入細胞也不會(huì )進(jìn)入脂質(zhì)體，但是一旦他們在培養基中積累就會(huì )慢慢地進(jìn)入細胞中。

Q:在靜脈注射Clodronate liposomes后動(dòng)物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是動(dòng)物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質(zhì)體在體外一段時(shí)間后會(huì )發(fā)生沉降。如果在很長(cháng)一段時(shí)間內需要一次注射多只動(dòng)物，那么脂質(zhì)體便會(huì )在注射器中發(fā)生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來(lái)，*只注射的計量與后一只注射的計量就會(huì )發(fā)生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質(zhì)體剛從冰箱取出后，沒(méi)有恢復到室溫。

Q:動(dòng)物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？

A：這個(gè)可能是受到細菌的污染，體內清除巨噬細胞后會(huì )增加例如病毒粒子，細菌或者酵母感染的幾率。

Q:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細胞并沒(méi)有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬細胞呈現ED1和ED2雙陽(yáng)性，但是有一些沒(méi)有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細胞也是ED1+，但是呈現ED2-。因此，所有ED2+的細胞都可以被*清除，但是ED1+的細胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細胞的比例。

Q: Clodronate liposomes沒(méi)有達到期望的效果？

A：氯磷酸脂質(zhì)體都是大批量的生產(chǎn)，每批次都會(huì )對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進(jìn)行檢測，確保無(wú)誤后才會(huì )銷(xiāo)售給客戶(hù)。另外，脂質(zhì)體容易收到溫度的影響。正確的運輸和儲存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過(guò)30℃。自收到貨物起，需要在3個(gè)月內使用完，不然有可能會(huì )影響使用的效果。

Q:在靜脈注射時(shí)，能不能增加注射的體積？

A：靜脈注射時(shí)需要依據動(dòng)物的體重，不能超過(guò)0.1ml/10mg，但是進(jìn)行腹腔注射可以適當的增加注射的體積。皮下注射需要根據注射位點(diǎn)的容量進(jìn)行決定。